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NobleRyder DNA連接酶

  • 型   號:CLO01-20KU
  • 價   格:
  • 更新時間:2024-11-21
  • 廠家性質(zhì):經(jīng)銷商

NobleRyder DNA連接酶
NobleRyder CLO01-20KU DNA連接酶 T4 DNA ligase(Rapid) 20KU
NobleRyder CLO01-80KU DNA連接酶 T4 DNA ligase(Rapid) 80KU

NobleRyder  CLO01-20KU  DNA連接酶  T4 DNA ligaseRapid  20KU

 

產(chǎn)品品牌:NobleRyder

產(chǎn)品貨號:CLO01-20KU

產(chǎn)品名稱:DNA連接酶

英文名稱:T4 DNA ligaseRapid

產(chǎn)品規(guī)格:20KU

 NobleRyder  DNA連接酶

產(chǎn)品內(nèi)容:

組分

CLO01-20KU

CLO01-80KU

T4   DNA Ligase (400U/μL)

50   μL

200   μL

10   x T4 DNA Ligase Buffer

100   μL

0.5   mL

5   x Rapid Ligase Buffer

200   μL

1   mL

 

產(chǎn)品簡介

T4 DNA Ligase是從表達T4 DNA連接酶基因的大腸桿菌中純化而來,可催化雙鏈DNARNA上的5'-磷酸末端和3'-羥基末端形成磷酸二酯鍵。該酶不僅能夠催化粘性末端或平末端之間的連接,還可以修復(fù)雙鏈DNA、RNADNA/RNA 雜交雙鏈中的單鏈切口。

 

活性定義

20μL的連接反應(yīng)體系中,6μg的λDNA-HindⅢ分解物在16℃下反應(yīng)30 min時,催化50%以上的DNA片段發(fā)生連接所需要的酶量定義為1個活性單位(U)

 

注意事項

1. 請于使用前確保產(chǎn)品wan全解凍,che底混勻后短暫離心,置于冰上備用。

2. T4 DNA Ligase 不穩(wěn)定,使用時冰上操作,用完立即放回-20℃。

3. 反復(fù)凍融會影響產(chǎn)品的性能。

4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

實驗方法

1.DNA片段與載體連接(粘性末端連接)

①冰上配制連接反應(yīng)體系:

試劑

體積

線性化載體DNA

20~100   ng

插入片段DNA

3:1~10:1(片段:載體摩爾比)

10   x T4 DNA Ligase Buffer

1   μL

T4   DNA Ligase (400U/μL)

1   μL

DNase-Free   Water

Up   to 10 μL

②反應(yīng)條件:

25 ℃反應(yīng)10 min。

2.DNA片段與載體連接(平末端連接)

①冰上配制連接反應(yīng)體系:

試劑

體積

線性化載體DNA

20~100   ng

插入片段DNA

1:1~5:1(片段:載體摩爾比)

5   x Rapid Ligase Buffer

2   μL

T4   DNA Ligase (400U/μL)

2   μL

DNase-Free   Water

Up   to 10 μL

* 平末端載體與片段進行連接時,應(yīng)首先將載體進行去磷酸化處理,防止其自身環(huán)化。

②反應(yīng)條件:

25 ℃反應(yīng)1 h16 ℃過夜。

3. DNA 文庫構(gòu)建中接頭連接反應(yīng)

①冰上配制連接反應(yīng)體系:T4 DNA Ligase (400U/μL)

試劑

體積

dA-tailed   DNA

10   μL

DNA   Adapter

1:10~1:20dA-tailed   DNA : DNA       Adapter 摩爾比)

5   x Rapid Ligase Buffer

4   μL

T4   DNA Ligase(400U/μl)

2   μL

DNase-Free   Water

Up   to 20 μL

②反應(yīng)條件:

25 ℃反應(yīng)10 min

如需失活T4 DNA Ligase 65℃反應(yīng)10 min 或者 70℃反應(yīng) 5 min。

 

產(chǎn)品訂購信息:

NobleRyder  CLO01-20KU  DNA連接酶  T4 DNA ligaseRapid  20KU

NobleRyder  CLO01-80KU  DNA連接酶  T4 DNA ligaseRapid  80KU

 NobleRyder  DNA連接酶


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